HILIC模式分析食品中的功能性糖類

近年來，食品中的功能性糖類的作用受到廣泛關注，分析的需求也越來越大。本文使用的Shodex HILICpak VG-50系列是一款適用于糖類和親水性化合物分析的聚合物基質氨基柱。填料使用鍵合了氨基的聚乙烯醇，下圖是填料的示意圖。

此色譜柱可以抑制還原糖和填料形成席夫堿吸附，得到良好的回收率。另外，不易有硅膠色譜柱的填料溶出問題，不易造成背景上升及MS中的離子化阻礙?？梢栽趬A性條件下使用。（pH使用范圍2-13）

本文使用HILICpak VG-50構建了食品中功能性糖類的分析條件。另外，結合實際樣品的前處理方法進行了討論，得到了對糖類分析的有用的結果，下面介紹應用實例。

乳果糖是乳制品中含有的調節腸內環境的功能性糖類。因為不會被消化、吸收，直達腸道，所以可以成為雙歧桿菌的營養液，增加雙歧桿菌的繁殖。乳果糖、乳糖、半乳糖的結構相似，在高效液相色譜中分離非常困難。

在HILIC模式中，通常使用乙腈和水的緩沖溶液作為流動相。最初，使用乙腈和水的混合溶液作為流動相，對上述三種二糖類的分離進行了研究。雖然調整了乙腈和水的比例，但無法完全分離出這些二糖類。而且，當乙腈的比例增加時，保留時間變長，基線噪聲變大，S/N下降（下圖）

因此，我們在流動相中添加了VG-50系列可以使用的甲醇，將水、乙腈、甲醇的混合溶液作為流動相，對分析條件進行了探討（下圖）。通過流動相中添加了甲醇，分離特性發生了變化，成功分離除了結構相似的二糖類。另外，檢量線的線性良好，定量性也高。

然后，對市售的乳制品飲料（成分中有乳果糖含量的記載）進行了測定。為了除蛋白，首先稱重1mL飲料，添加等量的乙腈，離心分離（890×g，10min），取上清液過0.45μm膜過濾器，作為試驗溶液。分析結果顯示，A、B兩種含乳飲料均含有乳果糖，進一步證實了可以與其他糖類分離（下圖）。以上表明VG-50 4E適用于飲料中的乳果糖分析。

分析條件同上。

稀少糖作為能使餐后血糖值上升緩慢、抑制內臟脂肪堆積的功能性糖類，被廣泛應用于食品中。

此外，由于其還有各種生物活性，被添加到醫藥品、功能性食品、化妝品中。本文對國際稀少糖學會定義的6種稀少糖的分離進行了探討。

最初，使用乙腈和水的混合溶液作為流動相，對6種稀少糖的分離進行了確認(下圖）。6種稀少糖不能實現完全分離，如果提升乙腈的比例，則S/N值會下降，所以放棄了使用乙腈和水作為流動相的方案。

因此，和分析乳果糖一樣，使用水、乙腈、甲醇的混合溶液作為流動相，對分離條件進行了研究。通過添加甲醇的方法成功分離了6種稀少糖。如下圖所示，檢量線的線性良好，定量性也很高。

接著，我們測定了市售的含有稀少糖的糖漿。首先取0.1g稀少糖糖漿，加入2.5mL超純水攪拌溶解。確認完全溶解后，加入2.5mL乙腈攪拌，然后過0.45μm的濾膜，作為試驗溶液?？梢詸z測出D-Psicose和D-Allose，進一步證實可以與其他糖分離（下圖）。另外，雖然在L-Glucose的位置出峰了，本條件下D-Glucose也是相同位置出峰，L體和D體的峰會重合。

乙基α-D-葡萄糖苷是清酒中特有的美味成分。近年來，因發現該成分具有保濕效果而備受關注。在此，我們對清酒中所含有的糖類和乙基α-D-葡萄糖苷的同時分析條件進行了研究。標準樣品使用糖類和乙基α-D-葡萄糖苷的混合標準液。將水和乙腈的混合溶液作為流動相進行了分離研究（下圖）。乙腈比例80%時得到了良好的分離效果，檢量線線性良好，定量性也很高。

接著分析了市售的清酒。量取1mL清酒，加入等量的乙腈攪拌均勻，過0.45μm濾膜，作為試驗溶液。分析結果顯示，清酒A、清酒B主要含有乙基α-D-葡萄糖苷和葡萄糖（下圖）。乙基α-D-葡萄糖苷后的成分不明，通過LC/MS檢測應該是分子量為138和252的兩種成分。

*分析條件同上